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Single-cycle kinetic evaluation

​작성: Hyeim Jeong

Multi-cycle kinetic (MCK) 방식은 가장 보편적으로 kinetic 평가하는 방식입니다.
그러나 MCK 분석의 적합한 조건을 찾는 것은 쉽지 않습니다. 
특히 regeneration 과정의 경우, analyte를 완벽히 제거하면서 ligand를 손상시키지 않아야합니다.

MCK 분석 조건의 최적화가 어려울 경우엔 single-cycle kinetic (SCK) 분석을 사용할 수 있습니다. SCK 분석은 regeneration 과정 없이 한 사이클 안에서 analyte를 가장 낮은 농도부터 점점 농도를 높여가며 주입하여 분석합니다.

​여기서는 MCK/SCK 분석 방식의 특징을 알아보고 결합 특성의 차이가 있는 지를 확인하였습니다.

Materials & Methods

▪    Instrument: iMSPR-ProX
▪    Sensor chip: C-Dex100
▪    Running buffer: 1xHBST, pH 7.4
▪    Immobilization method: Amine coupling
▪    Regeneration buffer: Glycine-HCl pH1.5
▪    Ligand: Protein A
▪    Analyte: Human IgG​

Results

image.png

(A) Single-cycle kinetics 

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(B) multi-cycle kinetics 

Table 1.png

위의 표에서 볼 수 있듯이 두 가지 분석 방식을 통한 kinetic 평가의 차이는 거의 없다고 할 수 있습니다. 그렇다면 두 가지 분석 방식은 각각 어떤 경우에 더 적합할까요?

앞서 말한 것처럼 regeneration 조건의 최적화가 어려울 때에는 SCK 분석 방식을 사용하는 것이 좋습니다. 또한 SCK 분석에서 앞의 여러 농도의 analyte의 dissociation은 짧게, 마지막 가장 높은 농도의 analyte의 dissociation을 길게 관찰하여 dissociation 경향을 평가합니다. 이는 총 kinetic 분석 시간을 줄이는 데에 도움이 됩니다.
그러나 상호작용의 특성에 따라서는 MCK에 비해 정보가 적은 SCK 만으로는 결합 평가가 어려울 수 있습니다. 특히 결합이 복잡한 형태인 경우, MCK 방식이 적합합니다. 또한 여러 농도 analyte 중 한 curve가 불량한 경우, MCK에서는 curve overlay에서 불량한 curve를 제거하여 평가할 수 있다는 장점이 있습니다.

아이클루바이오에서는 MCK와 SCK를 분석할 수 있는 S/W를 제공하고 있습니다.
분석하고자 하는 상호작용에 적합한 평가 방식을 선택하면 효율적인 분석 뿐만 아니라
상호작용의 동역학적 특성의 이해를 더욱 확장시킬 수 있습니다.

*본 자료에 소개된 실험 방법에 대한 자세한 문의는 sales@icluebio.co.kr로 문의 주시기 바랍니다.

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