가장 많이 사용되는
기본적인 분석 운용 버퍼 (running buffer)
10X HBST buffer (50ml, 500ml)
Hepes buffered saline with tween20
10배 농축된 HBST buffer 입니다.
리간드 고정화 (amime coupling, NTA-His, Avidin-biotin),
분자간 결합 실험의 운용버퍼로 사용됩니다.
본 버퍼는 filtration이 되어 있습니다.
성분
150mM NaCl
10mM HEPES
0.005% T20 surfactants
pH7.4
COOH 기능화 센서칩을 위한 Amine coupling 관련 시약
Amine coupling은 리간드가 단백질인 경우 단백질의 amine을 COOH 센서 칩에 공유결합 시키는 방법입니다. 단백질에는 lysine, arginine 등 amine 잔기를 보유하고 있는 아미노산이 풍부하기 때문에 매우 성공적으로 COOH 센서 칩에 고정시킬 수 있습니다.
이렇게 고정된 리간드는 공유결합이 되어 있기 때문에 regeneration 단계에서 탈착되지 않으며, 단백질 활성이 감소되지 않는다면 계속 사용이 가능한 장점이 있습니다.
하지만 단백질 활성부위가 센서 칩 표면에 고정되어 활성이 저하되는 경우가 있기 때문에 positive 샘플에서도 신호가 보이지 않는다면 다른 고정화 방법 (단백질에 tag이 있다면 비공유 특이결합으로 단백질을 방향성 있게 고정시킬 수 있습니다.)을 선택할 것을 권장합니다.
Amine coupling kit
리간드의 고정화를 위한 activation, blocking, elution 버퍼가 포함되어 있습니다. 본 시약 세트는 약 100회 사용이 가능합니다.
포함 목록
Activation 시약1: Activation buffer (NHS, 25 ml)
Activation 시약2: EDC, 1g
Acetate buffer 25 ml
Blocking 시약: Quenching buffer, 30 ml
Borate elution buffer, 50 ml
적용 센서칩
COOH-Au chip
C-Dex100
HC1000M
리간드 고정화 버퍼
이 버퍼는 리간드의 고정화를 위한 pH 별 acetate 버퍼입니다. 이 버퍼를 amine coupling kit과 사용하면 효과적으로 리간드를 COOH 기능화 칩에 고정시킬 수 있습니다.
리간드 단백질의 pI 값이 다르기 때문에 사용하는 단백질 고정화가 잘 제어되는 최적의 pH를 결정하기 위해 다양한 범위의 acetate buffer를 보유할 것을 권장합니다.
제품 목록
5mM acetate buffer pH4.0, 50ml
5mM acetate buffer pH4.5, 50ml
5mM acetate buffer pH5.0, 50ml
5mM acetate buffer pH5.5, 50ml
NTA-Histag 결합 관련 시약
재조합 단백질은 많은 경우 his-tag을 보유하고 있습니다. 단백질이 amine coupling 방법으로 잘 고정화 되지 않거나 결합신호가 약하다면 NTA 센서 칩에 his-tag 부위를 비공유 결합으로 고정시키는 방법을 선택할 수 있습니다.
이 방법은 regeneration 단계에서 리간드 단백질까지 탈착되기 때문에 리간드 단백질이 다양한 경우 사용하면 좋습니다. 같은 이유로 kinetics evaluation을 할때는 single cycle kinetics 방법을 권장합니다.
NTA와 6xhistidine 결합은 아주 강한 결합이 아니기 때문에 실험중 계속해서 탈착되는 경우가 있습니다. 충분한 washing을 진행한 후 drift가 최소화 되었을때 분석을 진행할 것을 권장합니다.
아이클루바이오에서 제공하는 NiHC1000M 센서 칩은 NTA와 6xhistidine의 결합력을 매우 강하게 향상시킨 특별한 제품입니다. 위와 같은 문제가 걱정된다면 NiHC1000M 사용을 권장합니다.
NTA 기능화 센서칩을 위한 Histag-protein Capture kit
Histag 단백질의 고정화를 위한 약 100회
사용기준 시약 세트입니다.
Running buffer, 50ml
Activation 시약: Nikel ion solution, 50ml
EDTA regeneration buffer, 50ml
Imidazole regeneration buffer, 50ml
적용 센서칩
NTA-Au chip
NiD200M
NiHC1000M
Regeneration buffers
리간드에 결합시킨 분석물질을 탈착시킴으로써 리간드 고정화된 센서칩 상태로 재생시킬 수 있는 주요 regeneration 시약들입니다.
제품 목록
10mM Glycine-HCl pH1.5, 50ml
10mM Glycine-HCl pH2.0, 50ml
10mM Glycine-HCl pH2.5, 50ml
10mM Glycine-HCl pH3.0, 50ml
50mM NaOH, 50ml
0.5% SDS, 50ml
장치 튜빙 관리를 위한 시약
장치 튜빙의 오염을 제거할 수 있는 유지/관리용 desorb 시약입니다.
제품 목록
Desorb solution1: 0.5% SDS, 500ml
Desorb solution2: 50mM Glycine pH9.5, 500ml