Surface Plasmon Resonance

SPR이란 ​골드 박막이 위에 올려진 프리즘 측면으로 광이 입사될 때, 특정 입사각에서 반사광이 사라지는 현상입니다. 센서 칩 위에서 생체 분자가 결합하면 표면 굴절률이 변하며 반사광의 각도가 이동합니다. 이 각도의 변화를 실시간으로 기록한 센서그램을 획득하여 분자간 결합을 모니터링합니다.

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SPR은 항원-항체부터 단백질, 핵산, 탄수화물, 지방, 세포, 바이러스 등 다양한 분자에서의 결합을 측정이 가능합니다.
또한 비표지 실시간 분석으로 분자 간 결합의 친화도(affinity) 뿐만 아니라 결합 속도 상수(association rate constant)와
해리 속도 상수(dissociation rate constant) 등의  kinetic 분석도 가능합니다.

Applications of SPR in Life Science

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Yes/No: 결합유무를 확인합니다. 리간드(A)가 고정화된 센서칩에 분석물질(B)를 간단히 흘려주어 반응유무를 확인할 수 있습니다.

Screening: 여러 분석물질을 동일한 리간드에 순차적으로 흘려주어 어느 분석물질이 결합이 우수한지 평가할 수 있습니다.

Concentration: 분석물질의 농도별 센서그램을 획득한 후 농도-신호 그래프를 통해 표준정량커브를 작성할 수 있습니다.

Affinity: 각 농도별 센서그램의 association 구간을 평형단계까지 획득하여 Langmuir isothermal curve를 작성한 후 평형상수 평가를 할 수 있습니다.

Kinetics: 각 농도별 센서그램의 association/dissociation 구간을 획득하여 curve fitting을 통해 속도상수 ka, kd를 평가할 수 있습니다.

Ligand Immobilization

Ligand immobilization 단계는 센서 칩 표면에 ligand를 고정시키는 단계입니다.
항체, 단백질, 핵산, 펩타이드 등 ligand로 사용되는 물질은 매우 다양합니다.
ligand 물질의 특성에 따라 센서 칩의 표면 기능기(COOH, Biotin, NTA)와 고정화 방법을 결정할 수 있습니다.

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Amine coupling을 이용한 immobilization

Analyte 결합 및 regeneration

Analyte 결합은 analyte 용액을 주입하여 ligand와 결합하며 실시간으로 그래프가 상승하는 association 단계와
running buffer만을 주입하여  ligand에 붙어있던 일부 analyte가 떨어지는 dissociation 단계로 나뉩니다.
이후 ligand에 붙어있는 남은 analyte는 regeneration 용액을 이용하여 제거하면 동일한 센서 칩에서 다른 농도 혹은 다른 종류의 analyte에 대해 계속하여 실험할 수 있습니다.  regeneration 용액은 낮은 pH 버퍼, 높은 pH 버퍼, 이온 강도가 높은 용액 등 다양한 용액들을 ligand-analyte 특성에 따라 선택하여 사용할 수 있습니다.

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SPR 교육 포스팅